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血浆凝固酶试验 血浆凝固酶试验

2017年12月16日 来源:血浆凝固酶试验 大字体小字体

  【方法】(1)玻片法:在1张洁净玻片中央加1滴9g/L氯化钠(生理盐水)溶液,用接种环取待检培养物与其混合(设阳性和阴性对照)制成菌悬液,若经10~20s内无自凝现象发生,则加入兔新鲜血浆1环,与菌悬液混合,观察结果。(2)试管法:用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释,取0.5ml于试管再加0.5ml待测菌浓菌悬液(需做阳性对照及阴性对照。),混匀后置37℃水浴中,每30min观察1次结果。若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固,阴性对照管(即浓菌液管)不凝固,为阳性;若阴性,继续观察到24小时,不凝固者为阴性。

  【应用】本试验仅用于致病性葡萄球菌的鉴定。

  (2)可选择的玻片凝集试验法还包括检测凝集因子和蛋白A的胶乳凝集试验。但胶乳凝集试验和玻片凝固酶试验的结果并不完全一致。尽管胶乳凝集试验鉴定路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)的可靠性较差,但鉴定金黄色葡萄球菌的特异性和灵敏性均高于传统的玻片凝固酶试验。有些腐生葡萄球菌和松鼠葡萄球菌及某些微球菌属的菌种可能胶乳凝集试验阳性,但玻片凝固酶试验通常阴性。

  【注意事项】(1)玻片法:10秒内观察结果,如超过10秒可出现假阳性,因此必须用试管法验证凝聚因子试验。

  葡萄球菌所产生的凝固酶有两种:结合凝固酶和游离凝固酶。

  【原理】   病原性葡萄球菌能产生血浆凝固酶,使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白,附于细菌表面,生成凝块,因而具有抗吞噬的作用。凝固酶试验对于判定该菌株是否具有致病力,很有帮助。葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。

  结合凝固酶(即凝聚因子):是一种结合于菌体细胞壁的酶,它直接作用于血浆中纤维蛋白原,使之变成纤维蛋白,而使葡萄球菌凝集成块,玻片法阳性结果是由此酶(凝聚因子)所致。

  细菌生成血浆凝固酶后释放于血浆中,称为游离凝固酶,不直接作用到血浆纤维蛋白原上,而是被血浆中的致活剂(即凝固酶致活因子)激活后变成耐热的凝固酶样物质,此物质纤维蛋白原变为固态纤维蛋白,血浆因而凝固。致病性葡萄球菌能产生凝固酶。货号:CM304

  【结果判断】(1)玻片法:5~10s内出现凝集者为阳性。(2)试管法:如有凝块或整管凝集出现为阳性。4h后无上述现象出现,则放置过夜后再观察。

  游离凝固酶:是凝血酶原样物质,不直接作用于血浆纤维蛋白原上,而被血浆中的致活剂(即凝固酶致活因子)激活后,变成耐热的凝血酶样物质,此物质可使血浆中的液态纤维蛋白原变为固态纤维蛋白,从而使血浆凝固。试管法的阳性结果为此酶所致。

  (2)试管法:用生理盐水将新鲜兔血浆4倍稀释,取0.5ml于试管再加0.5ml待测菌浓菌悬液(需做阳性对照及阴性对照。),混匀后置37℃水浴中,每30min观察1次结果。若3小时内试验管和阳性对照管出现凝固,阴性对照管(即浓菌液管)不凝固,为阳性;若阴性,继续观察到24小时,不凝固者为阴性。

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